PNA BIO INC致力于为基础研究和应用领域的实验室提供的研究产品和服务。

PNA Bio提供PNA(Peptide Nucleic Acid)产品,包括定制寡核苷酸,FISH探针,miRNA抑制剂,PNA钳夹探针和Fmoc单体。HPLC纯化后,它们与MS / MS数据一起提供> 95%的纯度。PNA产品由Panagene制造。

PNA Bio还提供工程化核酸酶服务,包括CRISPR / Cas9核酸酶(RGEN)合成,验证和Cas9蛋白以及敲除和敲入细胞系服务。

Cas9 Protein with NLS

含有NLS的Cas9蛋白

Cas9蛋白与指导RNA复合,为CRISPR / Cas9技术提供了优于质粒或mRNA转染的益处。大的好处是,您可以制备准备在体内工作的RNP复合物。Cas9蛋白寿命短(细胞半衰期约为24小时),因此可以大限度地减少脱靶效应和镶嵌现象。您还可以通过简单的切割试验轻松测试体外指导RNA的活性。此外,Cas9蛋白非常稳定,与mRNA相比,活性确认更容易。后,它在更广泛的生物体中是活跃的,例如线虫,昆虫,植物和非典型的模型系统,因为它不需要转录或翻译。

由PNA Bio提供的Cas9蛋白与NLS缀合,并且它是注射/转染准备形式。

Cy3-Cas9可以很容易地富集用CRISPR / Cas9复合物转染的细胞。

体外切割测定

将PCR产物与不同量的Cas9蛋白一起温育并在凝胶上运行。体外切割测定是检查sgRNA活性的简单方法。

转染RNP复合物

通过电穿孔(Neon)或脂质转染胺(LF2000)将sgRNA和不同量Cas9蛋白的RNP复合物转染到NIH3T3细胞中。

注射RNP复合物

对于小鼠胚胎注射,将60ng / ul Cas9蛋白的RNP复合物和两种sgRNA各15ng / ul注射到小鼠胚胎中。从幼仔准备尾部DNA并进行T7E1测定.Grey代表WT,绿色代表大的缺失(#2,3,4,8),红色代表小/ del(#5,6,7),蓝色代表纯合子小/ in(#9,10)。

Cas9蛋白

·来自化脓性链球菌的Cas9蛋白与NLS

·注射,转染准备好

·通过体外切割测定,电穿孔(作为RNP复合物)和每批次的小鼠胚胎注射验证活性

·标准浓度(CP01,重组至1 mg / ml):20 ug,50 ug或200 ug(50 ug x 4)

·高浓度(CP02和CP03,重组至5 mg / ml):250 ug(CP02)或1 mg(CP03,250 ug x 4)

·包装:CP01为20 ug或50 ug,CP02 / CP03为250 ug

·建议使用CP01进行显微注射,建议使用CP02 / CP03进行电穿孔

·也可用:D10A Nickase(CN01)和D10A / H840A dCas9(CD01)蛋白

液体形式的Cas9蛋白

·可用1 mg / ml或5 mg / ml

·CP04-100:1mg / ml(6μM),20μg×5管

·CP04-500:5mg / ml(30μM),100μg×5管

Nickase和dCas9蛋白

·D10A Cas9 Nickase蛋白与来自化脓性链球菌的NLS(CN01和CN02)

·D10A / H840A Cas9裂解死蛋白与来自化脓性链球菌的NLS(CD01和CD02)

·以50μg大小提供,重构为1mg / ml(CN01 / CD01)或250μg大小,重构为5mg / ml(CN02 / CD02)。

Cy3-Cas9和Cy3-dCas9蛋白

·Cy3标记Cas9蛋白与NLS(CP06),以实现转染细胞的分选和可视化

·通过共聚焦显微镜检测荧光

·通过体外切割测定和细胞转染确认活性

·可提供浓度为5 mg / ml的50 ug(CP06-50)或200 ug(CP06-200)

·还可获得Cy3标记的dCas9蛋白(CD07)

通过电穿孔进入细胞,然后进行T7E1测定,证实Cy3-Cas9蛋白的活性。通过共聚焦显微镜确认荧光。

产品

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